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Fricke, Matthias: Schnelle und hochsensitive multifokale Zwei-Photonen-Laser-Raster-Mikroskopie : neue Anwendungsgebiete in der Biologie, Chemie und Physik. 2007
Inhalt
Einleitung
Grundlagen der TPLSM
Theorie des Zwei-Photonen-Anregungsprozesses
Theorie der Fluoreszenzemission
Prinzipieller Aufbau eines TPLSM
Die verschiedenen Rasterverfahren
Parallel-Processing in der LSM -- multi-fokale TPLSM
Grundlagen des Parallel-Processing in der TPLSM
Realisierung des Parallel-Processing -- Aufbau des Strahlteilers
Bildverarbeitung beim Parallel-Processing
Theorie der Auflösung
Erreichbare laterale Auflösung
Erreichbare axiale Auflösung
GFP -- ein natürlicher Farbstoff
Photophysik von Quantendots
Weitere Aspekte der TPLSM
Strahlenschädigung und Ausbleichen der Proben
Farbstoffauswahl, Ausbleichen der Farbstoffe
Vorteile der TPLSM aus Sicht der Anwendung
Versuchsaufbau
Aufbau des multifokalen TPLSM im Überblick
Charakterisierung des SpectraPhysics MaiTai-Lasers
Charakterisierung des LaVision Biotec TriM-Scope
Charakterisierung des Olympus IX70-Mikroskopes
z-Positionierung der Beobachtungsebene
Bestimmung der PSF / Auflösung
Charakterisierung der Andor iXon EMCCD-Kamera
Empfindlichkeit des TPLSM unter typischen Messbedingungen
Anwendungen der multifokalen Zwei-Photonen-Laser-Raster-Mikroskopie
Bestimmung der maximal erreichbaren Auflösung mit Hilfe von Quantendots
Grundsätzliche Beobachtbarkeit der Quantendots
Bestimmung der Detektionseffizienz
Bestimmung der PSF als maximal erreichbare Auflösung
Flächige Anregung -- Abbilden ohne Rastern
Selbstorganisation in der Chemie: Morphosynthese sternförmiger Titandioxid/ Siliziumdioxid-Schalen
Lokalisierung struktureller und regulatorischer Komponenten von COP1-umhüllten Vesikeln in lebenden Wurzelzellen
Neurobiologie: Optische Kalzium-Messung in Nervenzellen
Prinzipieller Nachweis der Anwendbarkeit eines TPLSM zur in vivo-Kalzium-Messung
Multizeilen-TPLSM zur in vivo-Kalzium-Untersuchung
Auswirkung der Streuung auf die Auflösung
Diskussion und Ausblick
Zusammenfassung
Literatur
Publikationen mit eigener Beteiligung
Danksagung
Eidesstattliche Erklärung