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Greif, Dominik: Einzelzell-Proteinanalytik. 2013
Inhalt
1 Einleitung und Motivation
2 Grundlagen/Theoretischer Hintergrund
2.1 Grundlagen und Historie der Mikrofluidik
2.2 Mikrochip-Elektrophorese
2.3 Mikrochip-Zellkultivierung und Langzeitbeobachtung
2.4 Fluoreszenzdetektion von Proteinen
2.5 Zellen
2.5.1 Sf9 Insektenzellen
2.5.2 Das Bodenbakterium Sinorhizobium meliloti
3 Experimenteller Aufbau
3.1 UV/VIS-LIF Detektion
3.2 UV/VIS-LIF parallele Detektion
3.3 Fluoreszenzmikroskop
4 Material und Methoden
4.1 Verwendete Chemikalien
4.2 Zellkultivierung
4.2.1 Sf9-Zellkultur
4.2.2 Anzucht von Bakterien zur Untersuchung der Oberflächenstrukturen
4.2.3 Anzucht von Bakterien für das TLFI zur Bestimmung von zeit- und ortsaufgelöster Proteindynamik
4.3 Zellpräparation (für Experimente)
4.3.1 Waschen von Sf9 Zellen für Einzelzellexperimente
4.3.2 CFDA-SE Markierung aller Proteine in Sf9 Zellen
4.3.3 Präparation von Bakterien zur Untersuchung der Oberflächenstrukturen
4.3.3.1 Präparation für die Rasterelektronenmikroskopie (SEM)
4.3.3.2 Präparation für das XHR SEM
4.3.3.3 Präparation für das AFM in Trockenheit
4.3.3.4 Präparation für das AFM in Flüssigkeit
4.4 Hochauflösende Mikroskopie
4.4.1 Rasterelektronenmikroskopie (SEM)
4.4.1.1 Abbildung von Bakterien mit dem SEM
4.4.1.2 Abbildung von Bakterien mit dem XHR SEM
4.4.2 Rasterkraftmikroskopie (AFM)
4.4.2.1 Abbildung von Bakterien mit dem AFM in Trockenheit
4.4.2.2 Abbildung von Bakterien mit dem AFM in Flüssigkeit
4.5 Softlithographie
4.5.1 PDMS-Chips UV-LIF
4.5.2 PQW–Chips
4.5.3 Zell-Chips TLFI
4.5.3.1 Zellimmobilisierung
4.6 DRIESO
4.6.1 QG-Chips
5 Ergebnisse und Diskussion
5.1 Erste Einzelzellelektropherogramme in PDMS-Chips
5.1.1 FLIM
5.1.2 Spektren zur Untersuchung der UV-Hintergrundfluoreszenz
5.2 pH-Abhängigkeit
5.3 PQW-Chips
5.4 QG-Chips
5.5 Nachweisgrenze
5.6 Proteintrennung
5.7 Parallele Detektion
5.8 Oberflächenstrukturen von Bakterien
5.9 TLFI zur Bestimmung von Zeit- und Ortsaufgelöster Proteindynamik
6 Zusammenfassung und Ausblick
7 Literaturverzeichnis
8 Glossar
9 Danksagung
10 Anhang
10.1 Publikationen
10.2 Konferenzbeiträge