TY  - THES
AB  - Der elektroporative Transfer von DNA und anderen bioaktiven Substanzen durch Zellmembranen mittels elektrischer Pulse gewinnt zunehmend an Bedeutung in den neuen Disziplinen der Elektrochemotherapie und Elektrogentherapie. Die Effektivität des Elektrotransfers hängt wesentlich von der Adsorption der Gen-DNA und der Oligonucleotide an die Plasmazellmembran ab. Hier wird gezeigt, dass die Adsorption von längeren Oligonucleotiden, wie zum Beispiel ultraschall-behandelte Kalbs-Thymus DNA-Fragmente im Größenbereich von zirka 300 Basenparen an Lipidvesikel mit einem Durchmesser von [Phi] = 300 ± 90 nm durch divalente Kationen, wie z.B. Ca2+-Ionen, wesentlich verstärkt ist. Durch Zentrifugation werden freie und gebundene DNA bei der Wellenlänge [lambda] = 260 nm optisch bestimmt. Mittels Atom-Absorptionsspektrometrie (AAS) und mit Hilfe des Ca2+-Indikators Arsenazo-III werden die Dissoziationsgleichgewichtskonstanten sowohl der individuellen Binärkomplexe von Ca2+ und DNA-Bindung: Ca2+/Vesikel, DNA/Vesikel und Ca2+/DNA als auch die der drei verschiedenen Prozesse bestimmt, die zu dem Ternärkomplex: Ca2+/DNA/Vesikel führen.
Die Turbiditätsrelaxationen der Vesikelsuspension bei der Wellenlänge [lambda] = 365 nm in äußeren elektrischen Feldern mit Feldstärken von E / (kV/cm) = 30 und 40 und der Pulsdauer tE = 10 µs deuten an, dass die Elektroelongationen der Vesikel mit der Glättung der thermischen Ondulationen, Ausdehnung der Membran und bei höheren Feldstärken E >= 40 kV/cm auch mit der Elektroporation gekoppelt sind. Die quantitative Analyse der Ausdehnungskinetik zeigt, dass die DNA-Adsorption an die Vesikeloberfläche als Ternärkomplex DNA/Ca/Lipide die Membran weicher macht und damit die Elektroporation erleichtert.
Mit der Kenntnis aller Gleichgewichtskonstanten der Teilreaktionen der Entstehung des Ternärkomplexes und dem Verhalten des Ternärkomplexes DNA/Ca/Lipidvesikel in äußeren elektrischen Feldern kann man nun zielgerichtet die DNA-Adsorption für den elektroporativen Gentransfer, auch in der Elektrogentherapie, optimieren.
DA  - 2005
KW  - Gentransfer , Elektroporation , Dissoziationsgleichgewicht , Liposom , Doppelschicht , Dichroismus , Adsorption , DNS , Calciumion , Polynucleotide , Lipide , Ca/DNA/Lipide-Gleichgewichtskonstanten , Vesikel-Oberfläche , Elektro-Deformation , Lipid-Bilayer-Elastizität , Polynucleotides , Ca-binding constants , Electrified vesicle surface , Vesicle electro-deformation , Lipid bilayer elasticity
LA  - eng
PY  - 2005
TI  - DNA/Ca-Adsorption an Lipidmembran-Oberflächen für den effizienten elektroporativen Gen-Transfer in Gewebezellen
UR  - https://nbn-resolving.org/urn:nbn:de:hbz:361-7447
Y2  - 2024-11-22T08:22:09
ER  -