TY  - THES
AB  - In der vorliegenden Arbeit wurden Bindungsanalysen des neuronalen Zelladhäsionsmoleküls CHL1 (close homologue of L1) durchgeführt, die Interaktionspartner dieses kürzlich beschriebenen neuen Mitgliedes der L1-verwandten Unterfamilie isolieren sollten. Die extra- und intrazellulären Domänen von CHL1 wurden als rekombinante Fusionsproteine in verschiedenen biochemischen Interaktionsanalysen eingesetzt. Ein einzelnes Protein, das an die lösliche intrazelluläre Domäne von CHL1 in einem overlay Ansatz gebunden hat, konnte in der detergenzfreien löslichen Fraktion eines Maushirns nachgewiesen werden. Der mögliche Bindungspartner von CHL1 wurde mittels MALDI-MS als murines Hitzeschockprotein hsc70 identifiziert.
Die immunzytochemische Lokalisation der beiden möglichen Bindungspartner in primären Hippokampus-Neuronen zeigte eine charakteristische distinkte Ko-Verteilung, die auf eine verstärkte Interaktion in membranösen Subdomänen hinweist. Die Ko-Lokalisation in Subdomänen zeigte sich stärker in Zellen, die von älteren Tieren präpariert wurden als in Zellen von neugeborenen Tieren. CHL1 und hsc70 zeigten eine übereinstimmende Verteilung in detergenz-unlöslichen Subfraktionen angereicherter synaptosomaler Membranen. Eine Ko-Immunpräzipitation von CHL1 aus kruden Homogenaten 5 Tage alter und 3 Wochen alter Mäuse zeigte, dass die Interaktion in alten Tieren verstärkt war und die Präzipitation aus der detergenz-unlöslichen Fraktion nur bei 3 Wochen alten Tieren möglich war. Hsc70 ko-präzipitierte allerdings nur, wenn ADP als Ko-Faktor der Bindung anwesend war, nicht aber in der Gegenwart von ATP. Zusammengefasst zeigen diese Ergebnisse eine ADP-abhängige Interaktion von CHL1 und hsc70. Diese konnte auf zelluläre Subdomänen beschränkt werden, in denen die Interaktion möglicherweise durch eine bestimmte Konformation der Bindungspartner erleichtert wurde. Die Translokalisation der Bindung in detergenz-unlöslichen Fraktionen hängt von dem Entwicklungsstand der Tiere ab.
Ein mögliches Bindungsmotiv für hsc70 in der intrazellulären Domäne von CHL1 konnte identifiziert werden: Ein HPD-Tripeptid, das ursprünglich als hsc70-Bindestelle in der J-Domäne von molekularen Faltungsproteinen beschrieben wurde. Eine gerichtete Mutagenese, die zum Aminosäureaustausch des Histidin- beziehungsweise Aspartatrestes führte, konnte zeigen, dass das HPD-Tripeptid essentiell fur die Bindung von hsc70 ist.
Hinweise, dass die Bindung von CHL1 und hsc70 an strukturellen Reorganisationen des Zytoskeletts beteiligt ist, können nicht ausgeschlossen werden. Weil aber die Transfektion die Morphologie und Vitalität der Neurone dramatisch beeinflusste, war eine funktionelle Analyse der CHL1 - hsc70 Interaktion nicht möglich.
In dieser Arbeit konnte zum ersten Mal eine Interaktion zwischen einem Zelladhäsionsmolekül und einem Hitzeschockprotein demonstriert werden, die generiert wird über ein HPD-Tripeptid in der intrazellulären Domäne von CHL1. Diese Interaktion ist abhängig von dem Ko-Faktor ADP. Die Bindung konnte in zellulären Subdomänen lokalisiert werden und die Translokalisation der Interaktion war zeitlich abhängig vom Entwicklungsstand des Tieres. Eine Beteiligung der CHL1 - hsc70 Bindung an strukturellen Veränderungen des Zytoskeletts konnte nicht ausgeschlossen werden, wodurch sich interessante Möglichkeiten zur weiteren funktionellen Erforschung dieser Interaktion bieten.
DA  - 2002
KW  - Neurales Zell-Adhäsionsmolekül , Bindeproteine ,  , CHL1 , Cell adhesion , Binding partner , hsc 70 (heat shock cognate 70)
LA  - eng
PY  - 2002
TI  - Identification and characterization of intracellular binding partners of the CHL1 (close homologue of L1) neural cell recognition molecule
UR  - https://nbn-resolving.org/urn:nbn:de:hbz:361-4185
Y2  - 2024-11-21T16:05:01
ER  -