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Kovacic, Alina Isabel: HPV-induzierte Genmethylierung von Cyclin A1 bei malignen Tumoren des Rachens. 2019
Inhalt
Einleitung
Anatomie und Physiologie des Pharynx
Neoplasien
Kopf-Hals-Karzinome
Oropharynxkarzinome
Epidemiologie
Risikofaktoren
Stadien
Therapie und Prognose von Oropharynxkarzinomen
Humane Papilloma Viren
Nachweis von HPV
Entstehung eines Karzinoms durch high-risk HPV
Epigenetik
Genetische und epigenetische Veränderungen bei Oropharynxkarzinomen
Veränderungen durch HPV
Veränderungen bei HPV positiven und negativen Karzinomen im Vergleich
Cyclin A1
DNA-Methyltransferasen
Ziel der Arbeit
Material und Methoden
Material
Zelllinien
Zellkulturmaterialien
Kits
PCR- und Sequenzierungs-Materialien
Primer und Sonden
Geräte
Software
Methoden
Humane Orale Keratinozyten
DNA-Isolation
Bisulfit-Behandlung der DNA
RNA-Isolation
Reverse Transkription der RNA
Quantitative real-time PCR
Relative Quantifizierung
Erstellen der miRNA
Photometrische Bestimmung der Nukleinsäurekonzentration
Sequenzierung
Ergebnisse
Wachstum der Humanen Oralen Keratinozyten
Nukleinsäurekonzentrationen der isolierten DNA und RNA
Ergebnisse der Real-time-PCR zur Bestimmung der Expression von E6/E7 in den HOK
Ergebnisse der QMSP zur Bestimmung der Methylierung der Promotorregion von Cyclin A1
Real-time Reverse-Transkriptase-PCR-Ergebnisse zur Bestimmung der Expression von Cyclin A1
Ergebnisse der Real-time Reverse-Transkriptase-PCR zur Bestimmung der DNMT
Auswertung der Sequenzierung der miRNA
Diskussion
Kultivierung der HOK und Immortalisierung durch HPV16 E6 und E7
Methylierung von Cyclin A1 bei HOK und HPV16 E6 und E7 positiven HOK
Expression von Cyclin A1 und deren Korrelation zur Promotormethylierung
Expression der Methyltransferasen bei nativen und mit HPV16 immortalisierten HOK
Erstellen einer miRNA gegen E6 und E7
Ausblick
Literaturverzeichnis
Abkürzungsverzeichnis
Abbildungsverzeichnis
Tabellenverzeichnis