Die Optische-Einzeltransporter-Analyse (OSTR) zur Untersuchung von Membrantransport, wie durch den Kernporenkomplex (NPC), konnte durch Oberflächenmodifikationen und optisch angepasste Arrays entscheidend verbessert werden. So gelang in nukleocytoplasmatischen Transportmessungen an Xenopus laevis Kernmembranen der eindeutige Nachweis, dass Arx1 aus Hefe als neuer Transportrezeptor für ribosomale 60S-Vorstufen wirkt, da es den NPC ohne Cofaktoren mit einer Flussrate von 1.8 ± 0.5 Molekülen/NPC/s durchqueren kann. Zudem konnte das minimale Exportsystem für intronenthaltende RRE-RNA aus HIV-1 ermittelt werden. Dieses besteht neben der RRE-RNA aus dem retroviralen Adapter Rev, dem zelluläre Karyopherin Crm1 und RanGTP. Dabei bestimmt RanGTP allein die Unidirektionalität des Crm1 vermittelten Exports der RRE-RNA, wobei die Flussrate bei 2.7 ± 1.1 Molekülen/NPC/s lag. Ein solches in vitro System erlaubt somit die Überprüfung pharmakologischer Inhibitoren im späten HIV-1 Vermehrungszyklus.
Titelaufnahme
- TitelKinetische in vitro-Analyse nukleocytoplasmatischer Transportrezeptoren und retroviraler Substrate
- Verfasser
- Betreuer
- Erschienen
- SpracheDeutsch
- DokumenttypDissertation
- Schlagwörter (DE)
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- Nachweis
- IIIF
Optical Single Transporter Recording (OSTR) as fluorescence technique to study membrane transport processes particularly those through nuclear pore complexes (NPCs), was essentially improved by surface coating and optically modified arrays. Thus in nucleocytoplasmic transport experiments with Xenopus laevis nuclear membranes we could directly prove transport receptor capability of the yeast protein Arx1 within pre-60S ribosomal export as it diffuses through the NPC without any additional cofactor involvement at a mean flow rate of 1.8 ± 0.5 molecules/NPC/s. We further identified the minimal export system for partially spliced RRE-RNAs from HIV-1. This included Rev as retroviral adapter, Crm1 as cellular karyopherin and RanGTP. Thereby RanGTP alone determined unidirectionality of Crm1 mediated export of RRE-RNA at a mean flow rate of 2.7 ± 1.1 molecules/NPC/s. Such an in vitro export system finally allows direct testing of pharmacologic inhibitors in the late HIV-1 reproductive cycle.
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