TY  - THES
A3  - Spener, Friedrich Gottlieb
AB  - Hoher Probendurchsatz mit einem Ja-/Nein-Ergebnis und präzise Gehaltsbestimmung GVO-positiver Lebensmittel sind Ziele bei der Kennzeichnung gentechnisch veränderter Organismen (GVOs). Die Bestimmung eines für viele GVOs charakteristischen Proteins (Neomycinphosphotransferase Typ II, NPTII) erfolgte dazu nach Antikörpererzeugung immunologisch durch Western-Blot oder Sandwich-ELISA. Sensitive Detektion von GVO- und Spezies-DNA (CaMV35S-Promotor, Roundup Ready-Konstrukt, Soja-Lektingen) wurde dagegen durch Vervielfältigung in der PCR (normal/kompetitiv) in Kombination mit einem PCR-ELISA (Hybridisierung) erreicht. Dieses Verfahren wurden in einem Ringversuch (13 Teilnehmer) getestet (Schwellenwert-Beurteilung) und erwies sich als unkompliziert, robust und korrekt; gerade in Hinblick auf das hohe Probenaufkommen in der Routineanalytik ist es gewinnbringend einsetzbar. Absolute Quantifizierung war durch Einsatz von Doppelkompetitor- und Normierungsplasmiden und nach Validierung der Gleichheit von Amplifikations-Effizienzen möglich. Eine Überprüfung fand durch Realzeit-PCR und zertifizierte Standards statt. Screening of food components using a polymerase chain reaction (PCR) for the presence of genetic elements, such as the widespread cauliflower mosaic virus 35S promoter introduced into genetically modified organisms (GMOs), has become a routine method in modern food analysis. With the aim of developing a high throughput method suitable for automation we established a PCR-enzyme-linked immunosorbent assay (PCR-ELISA). It is based on specific hybridization of an immobilized, biotinylated PCR product with a digoxigenin-labelled internal probe; the label then serves in colorimetric immunodetection. With this fast and convenient method laborious blotting procedures and the use of hazardous ethidium bromide in gel staining are avoided. The optimized protocol for this PCR-ELISA allows the detection of as little as 0.1 ng amplicon in only 2 h. With this new technique we analyzed whole Roundup Ready soybeans as well as soybean flour with GMO contents ranging from 0.1% to 2%.
AU  - Brunnert, Hans-Josef
DA  - 2002
KW  - Kompetitive PCR
KW  - Kennzeichnung
KW  - Screening
KW  - Roundup Ready
KW  - Zeneca-Tomate
LA  - ger
PY  - 2002
TI  - Quantitative Nachweismethoden für Proteine und DNA aus gentechnisch veränderten Organismen in Lebensmitteln
UR  - https://nbn-resolving.org/urn:nbn:de:hbz:6-85659550610
Y2  - 2024-11-22T02:24:31
ER  -