Michel, Geert: Untersuchungen zu altersabhängigen Segregationsfehlern in den Oozyten von CBA/Ca-Mäusen. 2002
Inhalt
- Zusammenfassung
- Einleitung
- Entwicklung weiblicher Keimzellen in Mammaliern
- Der Zellzyklus
- Meiose I und II
- Charakteristische Veränderungen struktureller Elemente im Verlauf des Zellzyklus
- Die Rolle der Proteinkinasen im Verlauf der Meiose
- Regulation der MPF Kinaseaktivität durch Phosphorylierungs- Dephosphorylierungreaktionen an p34cdc2.
- Regulation der MPF Kinaseaktivität durch die Bindung an Cdk-Inhibitoren
- Ubiquitinierende Systeme: Der Anaphase Promoting Complex (APC) und der SCF
- Zellzykluskontrollpunkte
- Besonderheiten des Zellzyklus in der Entwicklung und Reifung der Oozyten von Mäusen
- Chromosomale Aberrationen in den Oozyten von Mammaliern
- Numerische Aberrationen in der Meiose
- Ursachen numerischer Aberrationen
- Die Maus als Modellorganismus für numerische Aberrationen während der Meiose
- Fragestellung und Ziele der Arbeit
- Material und Methoden
- Verwendete Tiere und Bestimmung des Ovulationszyklusses
- In vitro Reifung der Oozyten
- Wasser für die Kultur
- Herstellung der Kapillaren für die Manipulation der Oozyten
- Medien und andere Lösungen
- Isolation und Kultur der Oozyten
- Drogen
- Bestimmung der Reifungskinetik und der Reifungsrate
- Zytogenetische Analyse
- Immunfluoreszenz
- Verwendete Materialien und Aufbereitung
- Extraktionspuffer
- Weitere Lösungen und Antikörper für die Immunfluoreszenz
- Vorbereitung der Objektträger
- Indirekte Immunfluoreszenz
- Analyse der Histon-H1- und MBP Kinase Aktivität
- Verwendete Materialien und Aufbereitung
- Trennung der Proteine in der SDS-Polyacrylamid Gel elektrophorese und Bestimmung der spezifischen Aktivität der Substrate
- Statistische Auswertung
- Ergebnisse
- In vitro Reifung unbehandelter Oozyten von CBA/Ca Mäusen
- Reifungsraten und -kinetiken von in vitro gereiften Oozyten unstimulierter junger- und alter Mäuse
- Vergleich der Reifungskinetiken von in vitro gereiften Oozyten unstimulierter junger und alter Mäuse
- Chromosomale Anomalien in Oozyten von jungen- und alten unstimulierten CBA/Ca Mäusen
- Spreitungen von Ooyten junger und alter Mäuse nach 16 Stunden in vitro Reifung
- Frühe Spreitung in vitro-gereifter Metaphase I Oozyten junger- und alter Mäuse
- Einfluß von Gonadotrophinen auf die Rate chromosomaler Aberrationen und die Reifungskinetik
- Aktivität der Histon HI- und MBP-Kinasen in Oozyten
- Ergebnisse der Etablierung der Kinaseessays und Standardisierung der Messungen
- Vergleich der Kinase Aktivitäten junger und alter Mäuse
- Reifungsrate und Kinetik Nocodazol-inkubierter Oozyten
- Bestimmung einer Nocodazolkonzentration die nicht zu einem vollsändigen Block führt
- Reifungskinetik der Oozyten bei einer Nocodazolkonzentration von 12 ng/ml Medium
- Nocodazol-induzierte morphologische Veränderungen der Spindel in vitro gereifter Oozyten
- Diskussion
- Welche Rolle spielen die Unterschiede in der Reifungskinetik und Reifungsrate für die Aneuploidie?
- Vergleich der GVBD-Rate von Oozyten junger und alter CBA/Ca Mäuse
- Vergleich der Pb-Rate von Oozyten junger und alter CBA/Ca Mäuse
- Der Einfluss der Superovulation auf die Reifungsrate und Reifungskinetik
- Wie kommt es zu den altersabhängigen chromosomalen Aberrationen?
- Gibt es weitere Faktoren die zur chromosomalen Instabilität beitragen?
- Nocodazol aktiviert einen Kontrollpunkt und verzögert die Reifung der Oozyten
- Anhang