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Engels, Niklas: Studien an signalleitenden Adapterproteinen in wildtypischen und virusinfizierten Lymphocyten. 2005
Inhalt
Abkürzungen
ZUSAMMENFASSUNG 6
EINLEITUNG 7
MATERIALIEN UND METHODEN30
Konklusionen74
ZUSAMMENFASSUNG
ZIELE DER ARBEIT
MATERIALIEN UND METHODEN
Materialien
Antikörper
GST-Fusionsproteine
Peptide
Methoden
Zellkultur
Allgemeines
Zellkulturbedingungen
Zellinien
Einfrieren und Auftauen eukaryotischer Zellen
Durchflußcytometrie
Transiente Transfektion adhärenter Zellen
Molekularbiologische Methoden
Fragmentierung von DNA mit Restriktionsendonukleasen
Gelelektrophoretische Auftrennung von Nukleinsäu
Isolierung von DNA aus Agarosegelen
Phenol-Chloroform-Fällung von Proteinen
Ethanol-Fällung von DNA
Photometrische DNA-Konzentrationsbestimmung
Ligation von DNA-Fragmenten
Transformation kompetenter Bakterien
Plasmidisolierung
Isolierung von Gesamt-RNA aus eukaryotischen Zellen
Polymerase-Ketten-Reaktion (PCR)
Zielgerichtete Mutagenese
Reverse Transkriptions-PCR (RT-PCR)
RT-PCR-Expressionsanalyse
Klonierung von PCR-Fragmenten
Sequenzierung von DNA
Klonierung der humanen und murinen p120-cDNAs
Klonierung der humanen NBP64-cDNA
Biochemische Methoden
Stimulation von B-Zellen über den BCR
Stimulation von Zellen mit Pervanadat/H2O2
Affinitätsreinigungen mit Antikörpern, GST-Fusio
Kompetitionsexperimente mit Peptiden
Expression und Isolierung von GST-Fusionsproteinen
SDS-Polyacrylamid-Gelelektrophorese (SDS-PAGE)
Western-Blot-Analyse
Herstellung von Antiseren in Kaninchen
Datenbanken und Software
Identifizierung und Charakterisierung von Interaktionspartnern des Adapterproteins SLP-65
SLP-65 assoziiert mit Ig-?/Ig-? in vivo
Untersuchung der Rolle von SLP-65 für LMP2A-verm
Identifizierung neuer signalleitender Elemente in Lymphocyten
661 K E I I V I N T A V A C S N N S R N G I F D L P I S P G E E
691 L E V I D T T E Q N L V I C R N S K G K Y G Y V L I E H L D
Analyse der Gewebeexpression von p120
Klonierung der p120 cDNA aus humanen und murinen Zellen
Transfektion von p120-HA in Fibroblasten führt z
Sequenzvergleich verschiedener BEACH-Domänen
NBP64 wird präferentiell in lymphatischem Gewebe
DISKUSSION
Das LMP2A-vermittelte „maintenance-“ Signal verl
Identifizierung neuer signalleitender Elemente in Lymphocyten
NBP64: ein neuartiges BEACH-Domänen-Protein in L
Konklusionen
REFERENZEN
Lebenslauf