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Kaiser, Thilo Peter: Stimulation der allogenen T-Zell-Antwort auf normale und maligne B-Lymphozyten durch CD40Ligand. 2002
Inhalt
Lymphozytische Lymphome und Immunozytom
Rationale für eine Immuntherapie
2. Material und Methoden
2.1 Geräte, Materialien, Kulturmedien und Antikörper
Geräte
2.1.2 Materialien
2.1.3 Kulturmedien und Lösungen
2.1.4 Antikörper
2.2 Zelllinien
2.2.1 Suspensionszellkultur
2.2.2 tCD40L-Fibroblastenkultur
2.3 Gewinnung der Zellen aus dem Blut gesunder Probanden
2.3.1 Isolation der peripheren mononukleären Zellen (PMNC)
2.3.2 Aktivierung gesunder B-Lymphozyten über das CD40/CD40-Liganden-System
2.3.2.1 Vorbereitung der tCD40L-Platten
2.3.2.2 B-Lymphozyten-Kultur
2.3.3 Isolierung von CD8+-T-Zellen durch magnetische Separation
2.3.4 PHA-Blasten
2.4 Aufarbeitung der Patientenproben
2.4.1 Maligne B-Zellen
2.4.1.1 Aufarbeitung
2.4.1.2 Aktivierung über das CD40/CD40L-System
2.4.2 Knochenmarkstromazellen
2.4.3 T-Zellen
2.5 Induktion B-Zell-/bzw. lymphomspezifischer cytotoxischer T-Zellen
2.5.1 Vorbereitung der Stimulatorzellen
2.5.2 Kultivierung cytotoxischer T-Zellen
2.6 Durchflusszytometrische Analysen
2.7 Messung der zytolytischen Aktivität
2.8 Messung der Zytokinkonzentration
2.8.1 Zytokinkonzentration im Überstand der CTL-Kulturen
2.8.2 Koinkubationsansätze
2.8.3 Enzyme-linked immunosorbent-assay (ELISA)
Verdünnungsmedium
Endogen
Assay-Puffer
Statistische Auswertung und Präsentation
3. Ergebnisse
3.1 Vorbereitende Versuche mit gesunden PMNC
3.1.1 PMNC-Zellpopulationen
3.1.2 Aktivierung gesunder B-Zellen
3.2 Charakterisierung und Aktivierung maligner B-Zellen
3.2.1 Patientenkollektiv
3.2.2 Aktivierung maligner B-Zellen
3.2.2.1 Immunphänotyp nativer maligner B-Zellen
3.2.2.2 Immunphänotyp nach Aktivierung mit CD40Ligand
3.2.2.3 Wachstumsverhalten in der tCD40L-Kokultur
3.3 Zytotoxizität von CTL nach Stimulation mit aktivierten malignen B-Zellen
3.3.1 Stimulation autologer T-Zellen
Aktivierte B-NHL-Zellen
3.4 Zytokinantwort der CTL auf ihre Stimulation
3.4.1 Zytokine im Überstand der CTL-Kulturen
4. Diskussion
4.1 Diskussion der Einzelergebnisse
4.2 Resümee
5. Literaturverzeichnis
6. Danksagung
7. Lebenslauf
8. Abkürzungsverzeichnis