A pseudo-MRM method using high-resolution mass spectrometry is presented for the specific detection of truncated tissue factor (tTF), retargeted to tumor vasculature by GNGRAHA peptide (tTF-NGR), in serum. In order to increase sensitivity, serum proteins are pre-separated by 1D-gel electrophoresis and the gel band corresponding to recombinant human tTF-NGR is investigated. Calibration is performed using the gelseparated pure protein. The method relies on six unique tryptic peptides and is sensitive at the low fmol level.
Titelaufnahme
Titelaufnahme
- TitelPseudo-MRM method for the selective detection of truncated tissue factor
- Verfasser
- Enthalten inMercator Journal of Biomolecular Analysis, H. Mercator Journal of Biomolecular Analysis, S. 22-32
- Erschienen
- SpracheEnglisch
- DokumenttypAufsatz in einer Zeitschrift
- Schlagwörter (EN)
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Abstract
Zusammenfassung
Eine pseudo-MRM-Methode mittels hochauflösender Massenspektrometrie für den spezifischen Nachweis von truncated tissue factor (tTF; spezifiziert für Tumor-Vaskulatur durch das Peptid GNGRAHA, tTF-NGR) in Serum wird präsentiert. Zur Erhöhung der Nachweisgrenze werden die Serumproteine zunächst durch 1D-Gelelektrophorese getrennt, und nur die Bande, die rekombinantem humanem tTF-NGR entspricht, wird untersucht. Die Kalibrierung wird mit dem gel-getrennten reinen Protein durchgeführt. Die Methode nutzt sechs eindeutige tryptische Peptide und ist bis zu wenigen fmol empfindlich.